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较早公告: JW-A分液漏斗振荡器简单地说就是一个频率源,一般用在锁相环中。详细说就是一个不需要外信号激励、自身就可以将直流电能转化为交流电能的装置。一般分为正反馈和负阻型两种。所谓/振荡/,其涵义就暗指交流,振荡器包含了一个从不振荡到振荡的过程和功能。能够完成从直流电能到交流电能的转化,这样的装置就可以称为/振荡器/。JW-A分液漏斗振荡器是一种温度可控的恒温水浴槽和振荡器相结合的生化仪器,主要适用于各大中院校、医疗、石油化工、卫生防疫、环境监测等科研部门作生物、生化、细胞、菌种等各种液态、固态化合物的振
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组织捣碎匀浆机关于动物固体组织蛋白的提取
点击次数:1359 发布时间:2018-12-24
   关于动物固体组织蛋白的提取
  1.前夜将磁珠及匀浆管洗净置入75%乙醇中浸泡。早晨取出磁珠和匀浆管,自然晾干;也可放入烤箱中,速度较快。
  2.裂解液配制:RIPA:PMSF=100:1,现配现用。置入4℃冰上。
  3.抽蛋白:
  适量组织加入裂解液中。
  匀浆操作。
  手工匀浆:将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6-8分钟),充分研碎,使组织匀浆化。
  机器匀浆:用JJ-2组织捣碎匀浆机上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3~5次,在冰水中进行),皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。
  超声粉碎:用超声粉碎机进行粉碎,可用超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用40安培,5秒/次,间隙10秒反复3-5次。
  反复冻融:培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆,也可以反复冻溶3次左右(即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰,溶解,再结冰,再溶解,反复3次左右),但有部分酶活力会受影响。
  将组织匀浆转入1.5ml的EP管中(离心管)。12000r/min 4°C离心15min。
  离心后EP管中液体分三层,提取中间无色液相,移入新的EP管中。可-80℃保存。
  大多数蛋白样品可通过比色测定法定量。在典型的蛋白测定中,化学试剂加入到蛋白样品溶液里产生颜色变化,这一变化可由分光光度计或酶标仪检测,并与已知浓度的蛋白标准曲线作比较。如果样品数量较多,可以同时使用两种测定用酶标仪自动检测。当你选择一种蛋白测定方法时需要考虑两个因素:缓冲液的化学组成和检测的蛋白量。
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